人γH2AX酶聯免疫分析試劑盒

產品名稱：人γH2AX酶聯免疫分析試劑盒
貨號：GY-8524
包裝：液體盒裝（48T/96T）
貯藏：2—8°C，避光防潮保存。
有效期：6個月

試劑配制
、酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：×20ml/瓶。
4、標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：×0ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：×0ml/瓶。
6、標記抗體（Biotin-antibody）：×20μl/瓶（：00）
7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：×20μl/瓶（：00）
8、底物溶液（TMB Substrate）：×0ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
0、終止液（Stop Solution）：×0ml/瓶（2N H2SO4）。

試劑準備：
. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(8-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液mL，蓋好后室溫靜置大約0分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入50μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。

公司常年代理德國TSZ品牌、Mercodia品牌、Panbio品牌、Alpco品牌、CST品牌、IBL-America品牌、AbFrontier品牌、Calbiotech品牌、Anogen品牌、Ani Biotech品牌、AAT Bioquest品牌、Jaica品牌等ELISA試劑盒產品。

人γH2AX酶聯免疫分析試劑盒檢測中樣品的處理
．細胞培養物上清：細胞培養物于室溫000g，離心0分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。
2．血清：標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃,000g離心5分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
4．尿液：無菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測，要保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱保存。
5．組織勻漿：將組織標本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜，再經過二次反復凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測。注：取樣和樣品處理過程中，防止有毒物質對操作人員的危害，要采取相應的保護措施。
elisa酶聯免疫試劑盒(間接法)
() 抗原包被：用包被液將PEDV抗原作∶5稀釋包被反應板，每孔00μl，同時設陰性細胞培養物對照孔，置4℃過夜。
(2) 洗滌：用洗滌液洗滌2次，每次2min，瀝干。
(3) 加入被檢血清：用保溫液將被檢血清作∶00稀釋，加入反應板相鄰的兩個孔中，每孔00μl。同時作陰、陽性標準血清對照，置37℃孵育h。
(4) 洗滌3次：方法同上。
(5) 加入酶結合物：用保溫液將酶結合物作∶4 000稀釋，加入反應孔中，每孔00μl，置37℃孵育h。
(6) 洗滌3次：方法同上。
(7) 加入底物：每孔00μl，置室溫暗盒內顯色20min。
(8) 加入終止液：每孔50μl，靜置5min。
(9) 測定OD值：用檢測儀，于492nm波長，按儀器使用及制定標準要求調節儀器，測定各反應孔的OD值，記錄結果。

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注意事項：
.加樣：
①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件；
②用個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”，因此盡量采用水??；
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板-2次，或適當增加洗板的次數；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應5-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結果要在5-30 min內完成，定性測定用肉眼判讀試驗結果時，反應板應水平距離白色背景0-5 cm；定量測定時用酶標儀讀取結果，酶標儀不應置于陽光或強光照射下，需先預熱5-30 min再進行測試。